多克隆抗體能識(shí)別任一抗原上的多個(gè)表位,而單克隆抗體僅檢測(cè)任一抗原上的一個(gè)表位。兩者都是各有優(yōu)勢(shì),來(lái)一起看看單抗和多抗的優(yōu)缺點(diǎn):
【單克隆抗體】
優(yōu)點(diǎn)展示:
1. 雜交瘤制得后,就成為了恒定的再生源,所有批次都將相同–對(duì)確保實(shí)驗(yàn)步驟和結(jié)果的一致性和標(biāo)準(zhǔn)化非常有幫助。
2. 單克隆抗體通常在切片和細(xì)胞染色造成的背景較低。因?yàn)樗鼈円愿鼜?qiáng)特異性檢測(cè)一個(gè)靶表位,所以不太可能與其它蛋白質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。
3. 由于具有特異性,單克隆抗體非常適于用作分析測(cè)定中的一抗,或者用于檢測(cè)組織中的抗原,并且通常所產(chǎn)生的背景染色顯著低于多克隆抗體。
4. 與多克隆抗體相比,單克隆抗體的同質(zhì)性非常高。如果實(shí)驗(yàn)條件保持不變,單克隆抗體的各實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性很高。
5. 單克隆抗體的特異性能使其在混合物中和抗原地結(jié)合。
不足之處:
·可產(chǎn)生大量特異性抗體,但是可能特異性過(guò)強(qiáng)。
·經(jīng)過(guò)抗原的化學(xué)處理后比多克隆抗體更易于丟失表位。這可通過(guò)使用同一抗原的兩個(gè)或多個(gè)單克隆抗體進(jìn)行補(bǔ)償。
【多克隆抗體】
優(yōu)點(diǎn)展示:
1. 克隆抗體可有助于放大低表達(dá)水平的靶蛋白信號(hào),因?yàn)榘械鞍卓稍诙鄠€(gè)表位上結(jié)合不止一個(gè)抗體分子。但是這會(huì)給定量實(shí)驗(yàn)造成不利影響,因?yàn)榻Y(jié)果將變得不準(zhǔn)確。
2. 由于能識(shí)別多個(gè)表位,多克隆抗體可在IP/ChIP中得到更好的結(jié)果。
3. 比單克隆抗體更能容許抗原中的微小變化。
4. 它們會(huì)識(shí)別出與免疫原蛋白質(zhì)具有高同源性的蛋白質(zhì),或者從非免疫原物種的組織樣品中篩選靶蛋白,例如當(dāng)未測(cè)試物種中的抗原性質(zhì)未知時(shí),有時(shí)會(huì)使用多克隆抗體。這也使得檢測(cè)免疫原序列以確定是否有任何交叉反應(yīng)性非常重要。
5. 多克隆抗體通常是檢測(cè)變性蛋白質(zhì)的。
6. 多表位通??商峁└鼮橛辛Φ臋z測(cè)。
7. 多克隆抗體不適用于探測(cè)抗原的特定結(jié)構(gòu)域,因?yàn)榭寡逋ǔ?勺R(shí)別多個(gè)結(jié)構(gòu)域。
不足之處:
·易于產(chǎn)生批次間差異。
·產(chǎn)生大量非特異性抗體,有時(shí)可能在某些應(yīng)用中產(chǎn)生背景信號(hào)。
·多表位使得檢測(cè)免疫原序列以確定是否有任何交叉反應(yīng)性非常重要。