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細(xì)胞信號通路從激酶入手
更新時(shí)間:2015-06-04   點(diǎn)擊次數(shù):1371次

一般來說,探索細(xì)胞信號通路往往意味著研究磷酸化,比如分析激酶活性,甚至副產(chǎn)物(如ADP)。在此,我們就來看看研究人員如何通過監(jiān)控激酶活性來研究細(xì)胞信號通路。開發(fā)和生物技術(shù)中所使用的許多篩選都是生化分析,利用單個(gè)純化或重組的激酶將底物磷酸化。據(jù)賽默飛世爾研發(fā)部門的副總監(jiān)Kurt Vogel介紹,經(jīng)典的工具要算時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移(TR-FRET)分析,它們尋找不同條件下磷酸化活性的改變。在這個(gè)分析中,“底物通常是一個(gè)小的肽段,標(biāo)有熒光基團(tuán)。而磷酸化特異的抗體上標(biāo)有另一個(gè)熒光基團(tuán)。這樣當(dāng)抗體與磷酸化的肽段結(jié)合時(shí),這兩個(gè)熒光標(biāo)記彼此接近,可以發(fā)生FRET。一旦確定了目標(biāo)化合物,人們也可以進(jìn)行反向篩選,也就是換一換,通過單個(gè)化合物來篩選不同的激酶。短信已成為現(xiàn)代社會中一個(gè)*的溝通渠道。在細(xì)胞中,磷酸化事件充當(dāng)了這一渠道。大量相互連接的細(xì)胞信號通路依賴激酶(和磷酸酶)將關(guān)鍵信息傳遞給一系列信使,有時(shí)候甚至從膜結(jié)合的表面分子一路傳遞給轉(zhuǎn)錄因子。許多信使分子本身就是激酶,有若干個(gè)絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸殘基,能夠可逆地接受無機(jī)磷(Pi)。檢測它們的磷酸化狀態(tài),包括在狀態(tài)下如何改變,或如何被小分子所改變,是藥物篩選和基礎(chǔ)研究中的核心一環(huán)。

不過人們希望了解細(xì)胞信號通路系統(tǒng),以及它們?nèi)绾问艿讲煌蛩氐挠绊?,今天我們還沒有可靠的分析來測定細(xì)胞裂解液中特定激酶的活性,由于大部分肽段和蛋白質(zhì)底物都是混雜的,它們能被各種內(nèi)源性激酶磷酸化,因此你實(shí)際上同時(shí)測定了幾種不同的蛋白激酶。

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